PPP1R12C CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412332-ACT

PPP1R12CはMYPT3をコードしており、ミオシンホスファターゼの制御サブユニットとして、タンパク質ホスファターゼ1（PP1）をミオシンIIおよび関連基質へと誘導し、アクトミオシン収縮性を調節します。ミオシン軽鎖のリン酸化ダイナミクスを形成することで、PPP1R12Cは細胞骨格の組織化、細胞接着、細胞運動、ならびに組織構築やバリア機能に影響するメカノトランスダクション経路に寄与します。PP1依存的脱リン酸化の制御異常は、細胞移動や収縮シグナルの破綻と関連づけられており、これらは心血管系およびがん生物学でしばしば関与が示されるプロセスです。ホスファターゼの標的化とRhoA/ROCK駆動の収縮性をつなぐ結節点として、PPP1R12Cはリン酸化シグナル伝達ネットワークや細胞骨格依存性表現型の研究において重要です。

PPP1R12C CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PPP1R12Cの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PPP1R12C CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PPP1R12C 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPPP1R12C転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PPP1R12Cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPPP1R12C遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPPP1R12C依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPPP1R12C発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPPP1R12C経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。