PKR Plasmide Double Nickase (h): sc-400177-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PKR Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PKR Double Nickase Plasmid (h) e il PKR Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EIF2AK2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PKR Antibody (B-10): sc-6282
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PKR Plasmide Double Nickase (h) | sc-400177-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PKR Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400177-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF2AK2 codifica PKR, una chinasi serina/treonina inducibile dagli interferoni che agisce come sensore citosolico dell’RNA a doppio filamento durante le risposte antivirali e dell’immunità innata. Una volta attivata, PKR fosforila eIF2α per sopprimere l’inizio della traduzione, rimodellando la proteostasi cellulare e promuovendo programmi adattativi allo stress come la risposta integrata allo stress. PKR interagisce anche con le vie di segnalazione NF-κB e MAPK, contribuendo all’espressione di geni infiammatori, all’apoptosi e alla regolazione dell’autofagia. Un’attività deregolata di EIF2AK2/PKR è stata associata ad alterazioni delle interazioni ospite–patogeno, a infiammazione cronica e a cambiamenti della segnalazione legata allo stress osservati in diversi contesti patologici, a sostegno della sua utilità come nodo meccanicistico nella ricerca in immunologia e sullo stress cellulare.
PKR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EIF2AK2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EIF2AK2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EIF2AK2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EIF2AK2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.