PKC lambda/iota Plasmide Double Nickase (h): sc-402111-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PKC lambda/iota Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PKC lambda/iota Double Nickase Plasmid (h) e il PKC lambda/iota Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PRKCI. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PKC lambda/iota Antibody (E-7): sc-376344
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PKC lambda/iota Plasmide Double Nickase (h) | sc-402111-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PKC lambda/iota Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402111-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKCI codifica l’isoforma atipica della protein chinasi C PKC lambda/iota (PKCι), una chinasi serina/treonina che funge da componente centrale del complesso di polarità PAR insieme a PAR3 e PAR6. PKC lambda/iota integra segnali provenienti dalle GTPasi della famiglia Rho e dalle vie attivate da fattori di crescita per regolare la polarità apico‑basale, l’assemblaggio delle giunzioni serrate, la divisione cellulare asimmetrica e la migrazione direzionale. Attraverso la fosforilazione di substrati coinvolti nella polarità e nel traffico intracellulare, influenza il rimodellamento del citoscheletro e la dinamica delle vescicole che modellano l’organizzazione epiteliale. Una segnalazione PRKCI/PKC lambda/iota deregolata è stata associata ad alterazioni della polarità e a comportamento invasivo in diversi contesti tumorali, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici sulla segnalazione oncogenica e sull’architettura dei tessuti.
PKC lambda/iota Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PRKCI nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PRKCI. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PRKCI. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PRKCI interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.