Plásmido Doble Nickase (h) PKC lambda/iota: sc-402111-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PKC lambda/iota consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PKC lambda/iota (h) y el plásmido de doble nickasa PKC lambda/iota (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PRKCI. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PKC lambda/iota Anticuerpo (E-7): sc-376344
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PKC lambda/iota | sc-402111-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PKC lambda/iota | sc-402111-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKCI codifica la isoforma atípica de la proteína quinasa C PKC lambda/iota (PKCι), una quinasa de serina/treonina que actúa como componente central del complejo de polaridad PAR junto con PAR3 y PAR6. PKC lambda/iota integra señales de las GTPasas de la familia Rho y de vías activadas por factores de crecimiento para regular la polaridad apical–basal, el ensamblaje de las uniones estrechas, la división celular asimétrica y la migración direccional. A través de la fosforilación de sustratos de polaridad y de tráfico intracelular, influye en la remodelación del citoesqueleto y en la dinámica vesicular que dan forma a la organización epitelial. La desregulación de la señalización de PRKCI/PKC lambda/iota se ha asociado con alteraciones de la polaridad y comportamiento invasivo en múltiples contextos tumorales, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la señalización oncogénica y la arquitectura tisular.
PKC lambda/iota El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PRKCI en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PRKCI. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PRKCI. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PRKCI alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.