PITSLRE B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402477-ACT

CDK11A codifica la chinasi ciclina‑dipendente PITSLRE B, una chinasi serina/treonina implicata nel coordinare la progressione del ciclo cellulare con l’elaborazione dell’RNA e il controllo trascrizionale. PITSLRE B è stata associata alla regolazione dello splicing del pre‑mRNA, a eventi mitotici e a segnali di risposta allo stress, in linea con ruoli nel mantenimento dell’omeostasi proliferativa. In quanto regolatore della famiglia delle CDK, un’alterata attività di CDK11A può influenzare vie che governano il controllo dei checkpoint, l’apoptosi e i programmi di espressione genica, spesso deregolati nel cancro e in altri disturbi proliferativi. Queste proprietà rendono CDK11A/PITSLRE B un bersaglio utile per indagare i meccanismi della divisione cellulare, l’accoppiamento tra trascrizione e splicing e fenotipi di vitalità dipendenti dal contesto in modelli cellulari umani.

PITSLRE B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CDK11A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PITSLRE B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CDK11A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CDK11A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PITSLRE B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CDK11A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PITSLRE B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PITSLRE B nelle cellule tumorali con espressione di CDK11A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.