Pin1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400485-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Pin1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Pin1 Double Nickase Plasmid (h) e il Pin1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PIN1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Pin1 Antibody (G-8): sc-46660
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Pin1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400485-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Pin1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400485-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **PIN1** codifica Pin1, una peptidil-prolil cis/trans isomerasi dipendente dalla fosforilazione che riconosce i motivi Ser/Thr-Pro e catalizza cambiamenti conformazionali che controllano la stabilità proteica, la localizzazione e l’output di segnalazione. Pin1 integra segnali provenienti da chinasi dirette verso la prolina e modula vie centrali per la progressione del ciclo cellulare, la regolazione trascrizionale, le risposte al danno del DNA e la segnalazione da stress attraverso substrati quali ciclina D1, c-Myc, p53 e tau. Rimodellando le conformazioni delle fosfoproteine, Pin1 influenza il turnover mediato dall’ubiquitina e il controllo dei checkpoint, collegando le dinamiche di fosforilazione alla proteostasi. Un’attività deregolata di PIN1 è stata associata a programmi di segnalazione oncogenici e a processi neurodegenerativi, rendendolo un nodo ampiamente utilizzato per studi meccanicistici della regolazione guidata dalla fosforilazione.
Pin1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PIN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PIN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PIN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PIN1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.