Pilt Plasmide Double Nickase (m): sc-428717-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Pilt Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Pilt Double Nickase Plasmid (m) e il Pilt Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Tjap1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Pilt Plasmide Double Nickase (m) | sc-428717-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Tjap1** codifica **Pilt**, un fattore associato alle giunzioni implicato nell’organizzazione dei contatti cellula–cellula negli epiteli e nel coordinamento della dinamica del citoscheletro, con effetti sulla formazione della barriera e sull’architettura tissutale. Pilt è collegato a processi quali l’assemblaggio delle tight junction, il mantenimento della polarità e la regolazione della permeabilità paracellulare attraverso l’impalcatura di complessi proteici e il cross-talk di segnalazione. L’alterazione dell’omeostasi giunzionale può influire su proliferazione, differenziamento e segnalazione infiammatoria, rendendo Tjap1 un locus utile per studiare i meccanismi alla base della disfunzione epiteliale in contesti rilevanti per la malattia. Lo studio di Tjap1 supporta la mappatura funzionale delle vie delle giunzioni, dei programmi di morfologia cellulare e delle risposte allo stress in modelli murini.
Pilt Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tjap1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tjap1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tjap1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tjap1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.