PI 3-kinase p85β Plasmide Double Nickase (h): sc-401991-NIC

PIK3R2 codifica la subunità regolatoria p85β della fosfoinositide 3-chinasi (PI3K) di classe IA, che stabilizza e modula le isoforme catalitiche p110 e collega le tirosin-chinasi recettoriali attivate e le proteine adattatrici alla segnalazione a valle PI3K–AKT–mTOR. Attraverso il controllo della generazione di PIP3, la PI3-chinasi p85β influenza la crescita cellulare, la sopravvivenza, il metabolismo, la dinamica del citoscheletro e il traffico vescicolare, integrando segnali provenienti dalle vie dell’insulina/IGF e dei fattori di crescita. Un’alterata regolazione della via PI3K è ampiamente implicata nella segnalazione oncogenica, nella disregolazione metabolica e nella funzione delle cellule immunitarie, rendendo PIK3R2 un nodo rilevante per analizzare l’architettura della via e i meccanismi di feedback. In ambito di ricerca, la perturbazione di PIK3R2 supporta studi meccanicistici sull’utilizzo delle diverse isoforme di PI3K, sull’ampiezza/terminazione del segnale e sul cross-talk della via con i complessi MAPK e mTOR.

PI 3-kinase p85β Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PIK3R2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PIK3R2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PIK3R2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PIK3R2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.