Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PI 3-kinase p110β Plasmide Double Nickase (m): sc-428980-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PI 3-kinase p110β Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PI 3-kinase p110β Double Nickase Plasmid (m) e il PI 3-kinase p110β Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Pik3cb. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PI 3-kinase p110β Antibody (C-8): sc-376641
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PI 3-kinase p110β Plasmide Double Nickase (m) | sc-428980-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PI 3-kinase p110β Plasmide Double Nickase (m2) | sc-428980-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Pik3cb codifica la subunità catalitica p110β della fosfoinositide 3-chinasi di classe IA, una chinasi lipidica che fosforila il PIP2 generando PIP3 e propagando la segnalazione PI3K–AKT. Nelle cellule murine, p110β contribuisce alla segnalazione mediata dai recettori per i fattori di crescita e dai GPCR, coordinando processi a valle quali sopravvivenza cellulare, proliferazione, metabolismo, traffico vescicolare e dinamica del citoscheletro. Agisce in concerto con le subunità regolatorie p85 per controllare l’ampiezza della via e la segnalazione a livello spaziale. La disregolazione dei componenti della via PI3K, inclusa un’attività alterata di p110β, è ampiamente studiata in contesti di crescita cellulare aberrante, fenotipi metabolici e difetti di segnalazione correlati al sistema immunitario.
PI 3-kinase p110β Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Pik3cb nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Pik3cb. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Pik3cb. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Pik3cb interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.