Perlecan Plasmide Double Nickase (h): sc-400823-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Perlecan Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Perlecan Double Nickase Plasmid (h) e il Perlecan Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HSPG2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Perlecan Antibody (E-6): sc-377219
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Perlecan Plasmide Double Nickase (h) | sc-400823-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Perlecan Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400823-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPG2 codifica perlecan, un grande proteoglicano eparan-solfato delle membrane basali e delle matrici pericellulari che lega fattori di crescita e componenti strutturali della matrice extracellulare (ECM) per regolare l’architettura tissutale. Perlecan modula l’adesione cellulare, la meccanotrasduzione e la segnalazione dei morfogeni organizzando gradienti e interazioni da co-recettore in vie quali FGF, VEGF e TGF-β, influenzando angiogenesi, condrogenesi e risposte alle ferite. Le sue funzioni nella matrice extracellulare sono strettamente legate all’integrità vascolare e all’omeostasi della cartilagine, e alterazioni dell’espressione o della struttura di HSPG2 sono state associate a patologie scheletriche congenite e al rimodellamento del microambiente tumorale, rilevante per studi su invasione e segnalazione stromale. In quanto organizzatore della matrice, perlecan è frequentemente analizzato in modelli di cellule endoteliali, di muscolatura liscia e stromali per dissezionare i segnali extracellulari che controllano proliferazione e migrazione.
Perlecan Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HSPG2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HSPG2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HSPG2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HSPG2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.