Per2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401089-ACT

ヒトPER2は、中核となる概日時計制御因子Per2をコードしており、PASドメインを有するタンパク質として、24時間周期のリズムを制御する転写–翻訳フィードバックループに関与します。PER2は、抑制複合体の動態を調節することでCLOCK/ARNTL（BMAL1）駆動性の転写を協調させ、さらに代謝、DNA損傷応答、細胞周期進行といった細胞プログラムと時間情報を統合します。グルココルチコイド、AMPK、MAPK関連ネットワークなどのシグナル伝達経路と概日転写を結び付けることで、PER2は組織特異的なリズム性遺伝子発現に影響を及ぼします。PER2活性の破綻や概日リズムの乱れは、睡眠–覚醒障害や、がん化・代謝表現型に対する感受性の変化と関連づけられており、システムバイオロジーおよび機序解明研究における有用な標的となっています。

Per2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PER2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Per2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PER2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPER2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Per2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPER2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPer2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPER2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPer2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。