Per1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401260-ACT

Il gene umano **PER1** codifica il regolatore circadiano **Period 1 (Per1)**, un componente fondamentale dell’orologio molecolare che genera ritmi prossimi alle 24 ore attraverso circuiti di feedback trascrizionale–traduzionale. Per1 partecipa alla regolazione circadiana dell’espressione genica in vie che controllano la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA, il metabolismo e la segnalazione endocrina, interfacciandosi con la trascrizione guidata da **CLOCK/ARNTL** e con la repressione mediata da **CRY**. Alterazioni dell’espressione o della ritmicità di PER1 sono state associate a disturbi del ritmo circadiano e riportate in studi sulla biologia dei tumori, su fenotipi legati all’umore e sulla disregolazione metabolica, a testimonianza di effetti ampi sui meccanismi di temporizzazione cellulare. Poiché PER1 collega gli stimoli ambientali a programmi trascrizionali a valle, viene spesso utilizzato per analizzare reti controllate dall’orologio e fenotipi cellulari dipendenti dall’ora del giorno.

Per1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PER1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Per1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PER1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PER1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Per1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PER1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Per1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Per1 nelle cellule tumorali con espressione di PER1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.