PDF Plasmide Double Nickase (h): sc-409495-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PDF Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PDF Double Nickase Plasmid (h) e il PDF Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PDF. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PDF Plasmide Double Nickase (h) | sc-409495-NIC | 20 µg | $410.00 |
La PDF umana (peptide deformylase, mitocondriale) codifica una metalloproteasi che rimuove i gruppi N-formile dai polipeptidi nascenti codificati dal mitocondrio, un passaggio chiave nel controllo qualità della traduzione mitocondriale e nella maturazione dei componenti della fosforilazione ossidativa. Accoppiando la rimozione del gruppo formile alle fasi successive di processamento e alla stabilità delle proteine mitocondriali, PDF supporta l’assemblaggio della catena respiratoria, la proteostasi mitocondriale e il metabolismo energetico cellulare. L’alterazione della traduzione mitocondriale e della proteostasi è ampiamente collegata a risposte da stress bioenergetico, a una gestione modificata delle specie reattive dell’ossigeno e alla segnalazione correlata all’apoptosi. Di conseguenza, PDF è spesso studiata nel contesto dei meccanismi di disfunzione mitocondriale rilevanti per la neurodegenerazione, i fenotipi cardiometabolici e l’adattamento metabolico delle cellule tumorali.
PDF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PDF nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PDF. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PDF. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PDF interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.