PDE3B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401773-ACT

ホスホジエステラーゼ3B（PDE3B）は、cAMPおよびcGMPを加水分解する二重特異性の環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼであり、細胞種依存的にセカンドメッセンジャーシグナル伝達のダイナミクスを調整します。cAMP/PKAシグナルを制限しつつ、インスリン作動性、アドレナリン作動性、ならびに炎症性の入力と連携することで、PDE3Bは脂肪分解、糖恒常性、エネルギーバランスの制御に寄与し、脂肪細胞や肝細胞に関連する代謝シグナル伝達において重要な役割を担います。PDE3B活性は、脂質の取り扱い、ミトコンドリア機能、サイトカイン応答性経路に影響する下流の転写プログラムおよびリン酸化ネットワークにも作用します。PDE3Bの発現やシグナル伝達の破綻は、代謝疾患の表現型や心血管代謝リスクに関わる経路と関連付けられており、インスリン抵抗性や関連疾患の研究における機序的な結節点としての有用性が示唆されています。

PDE3B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PDE3Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PDE3B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PDE3B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPDE3B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PDE3Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPDE3B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPDE3B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPDE3B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPDE3B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。