PDE3A Plasmide Double Nickase (h): sc-402183-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PDE3A Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PDE3A Double Nickase Plasmid (h) e il PDE3A Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PDE3A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PDE3A Antibody (2D7): sc-293446
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PDE3A Plasmide Double Nickase (h) | sc-402183-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PDE3A Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402183-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La fosfodiesterasi 3A (PDE3A) è una fosfodiesterasi dei nucleotidi ciclici a doppia specificità che idrolizza cAMP e cGMP, contribuendo così a modellare la dinamica dei secondi messaggeri a valle della segnalazione mediata da GPCR e dall’ossido nitrico. Controllando il turnover dei nucleotidi ciclici, PDE3A influenza processi regolati da PKA/PKG, tra cui l’attività dei canali ionici, la funzione piastrinica e la contrattilità della muscolatura liscia vascolare, oltre a una più ampia integrazione dei segnali tra le vie del cAMP e del cGMP. Alterazioni dell’attività di PDE3A sono state associate a fenotipi cardiovascolari ed ematologici disregolati, rendendola un bersaglio utile per studi meccanicistici delle reti di segnalazione dipendenti dai nucleotidi ciclici nelle cellule umane.
PDE3A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PDE3A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PDE3A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PDE3A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PDE3A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.