PCNA Plasmide Double Nickase (h): sc-400037-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PCNA Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PCNA Double Nickase Plasmid (h) e il PCNA Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PCNA. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PCNA Antibody (PC10): sc-56
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PCNA Plasmide Double Nickase (h) | sc-400037-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PCNA Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400037-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PCNA (antigene nucleare delle cellule proliferanti) è una clamp scorrevole del DNA, conservata evolutivamente, che circonda il DNA a doppia elica per aumentare la processività delle polimerasi replicative e coordinare l’assemblaggio dei complessi di replicazione e riparo. Funziona come piattaforma centrale per le proteine che contengono motivi PIP-box e integra segnali mediati da modificazioni post-traduzionali, tra cui ubiquitinazione e SUMOilazione, per indirizzare la sintesi per bypass delle lesioni (translesion synthesis), il cambio di stampo (template switching) e la scelta della via di riparo. PCNA è essenziale per la progressione della fase S, la maturazione dei frammenti di Okazaki e molteplici processi di risposta al danno al DNA, collegando lo stress replicativo al controllo dei checkpoint e al ripristino della cromatina. Programmi di replicazione e riparo dipendenti da PCNA deregolati sono ampiamente associati a fenotipi di instabilità genomica studiati nel cancro, nelle neurodegenerazioni e in altri disturbi della manutenzione del DNA.
PCNA Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PCNA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PCNA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PCNA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PCNA interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.