PC-PLD2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402056-NIC

Il gene umano **PLD2** codifica la fosfolipasi D2 (PC-PLD2), un enzima associato alla membrana che idrolizza la fosfatidilcolina generando acido fosfatidico, un secondo messaggero lipidico che modella la curvatura di membrana e i microdomini di segnalazione. L’attività di PLD2 si integra con vie attivate dai recettori, incluse quelle di EGFR, dei GPCR e delle piccole GTPasi, influenzando il traffico vescicolare, l’endocitosi, il rimodellamento del citoscheletro di actina e la migrazione cellulare. Attraverso la regolazione, dipendente dall’acido fosfatidico, della segnalazione mTOR e MAPK, PLD2 contribuisce a risposte cellulari di tipo metabolico e legate alla crescita ed è stata associata anche a esiti di segnalazione infiammatoria. Un’alterata regolazione della segnalazione di PLD2 è stata riportata in diversi contesti, come l’invasività delle cellule tumorali, la chemiotassi delle cellule immunitarie e i processi neuroinfiammatori, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici sulla segnalazione mediata dai lipidi.

PC-PLD2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PLD2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PLD2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PLD2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PLD2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.