PC-PLD2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402056-ACT

Il gene umano **PLD2** codifica la fosfolipasi D2, un enzima associato alla membrana che idrolizza la fosfatidilcolina generando acido fosfatidico, un secondo messaggero lipidico che modella la dinamica delle membrane e la segnalazione. L’attività **PC-PLD2** supporta la trasduzione del segnale indotta dai recettori, l’endocitosi e il traffico vescicolare, nonché il rimodellamento del citoscheletro, integrando input provenienti dalle vie dei fattori di crescita e dei GPCR con reti a valle quali **PI3K–AKT** e **mTOR**. Attraverso la regolazione della migrazione e dell’adesione cellulare e della produzione di mediatori infiammatori, PLD2 contribuisce a processi rilevanti per la segnalazione oncogenica, la funzione delle cellule immunitarie e le risposte allo stress metabolico. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di PLD2 sono state associate a una proliferazione e motilità deregolate nella biologia dei tumori e a quadri di fisiopatologia infiammatoria, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici della segnalazione lipidica.

PC-PLD2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PLD2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PC-PLD2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PLD2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PLD2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PC-PLD2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PLD2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PC-PLD2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PC-PLD2 nelle cellule tumorali con espressione di PLD2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.