Pax-6 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-422119-LAC

Il gene murino Pax6 codifica il fattore di trascrizione a paired box Pax-6, un regolatore maestro dello sviluppo dell’occhio, del proencefalo e del compartimento endocrino del pancreas, che controlla la specificazione delle linee cellulari, il mantenimento dei progenitori e la differenziazione neuronale. Pax-6 si lega a elementi promotori ed enhancer per coordinare programmi trascrizionali a valle dei segnali morfogenetici dello sviluppo e per modulare la regolazione genica dipendente dalla cromatina durante la modellazione dei tessuti. In contesti adulti, Pax-6 contribuisce alla plasticità neuronale e all’espressione di geni endocrini, collegando il suo dosaggio a vie che governano le transizioni del destino cellulare e la stabilità degli stati di differenziazione. Un’attività PAX6 deregolata è associata a malformazioni oculari congenite e a fenotipi del neurosviluppo, rendendolo un nodo chiave per lo studio delle reti regolatorie geniche dello sviluppo e del controllo trascrizionale rilevante per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale Pax-6 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Pax6 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Pax-6 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Pax6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Pax-6. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Pax6 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.