PADI4 Plasmide Double Nickase (h): sc-402657-NIC

PADI4 codifica la peptidil arginina deiminasi 4 (PAD4), un enzima calcio-dipendente che catalizza la citrullinazione dei residui di arginina delle proteine, rimodulandone la carica e regolando l’architettura della cromatina. La citrullinazione degli istoni mediata da PAD4 modula programmi trascrizionali e si interseca con il controllo epigenetico dell’espressione di geni infiammatori, la formazione delle trappole extracellulari dei neutrofili (NET) e la segnalazione dell’immunità innata. Un’attività disfunzionale di PADI4 è stata associata ad autoimmunità e infiammazione cronica, e profili di citrullinazione alterati vengono spesso studiati nell’artrite reumatoide, nel lupus e nei microambienti immunitari associati ai tumori. Di conseguenza, PADI4 è ampiamente impiegato in studi sulla regolazione della cromatina, sulla biologia dei neutrofili e sulle reti di segnalazione guidate da modificazioni post-traduzionali.

PADI4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PADI4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PADI4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PADI4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PADI4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.