PABP Plasmide Double Nickase (h): sc-400688-NIC

Il gene umano **PABPC1** codifica la **poly(A)-binding protein (PABP)**, un fattore chiave legante l’RNA che riveste le code poli(A) degli mRNA e coordina l’inizio della traduzione, la stabilizzazione dell’mRNA e il suo turnover dipendente dalla deadenilazione. Attraverso interazioni con **eIF4G** e con altri componenti della macchina di traduzione, PABP promuove la circolarizzazione dell’mRNA e regola le velocità di sintesi proteica, influenzando anche il silenziamento mediato da miRNA e la dinamica dei granuli da stress. Il controllo del destino dei trascritti dipendente da PABP collega **PABPC1** a vie che governano la crescita cellulare, le risposte allo stress e il controllo qualità dell’RNA. Alterazioni del metabolismo dell’RNA e del controllo traduzionale implicano i processi associati a PABPC1 nella biologia del cancro e in fenotipi rilevanti per la neurodegenerazione, in cui la modificata stabilità degli mRNA e la proteostasi alterata sono caratteristiche comuni.

PABP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PABPC1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PABPC1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PABPC1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PABPC1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.