P2Y6 Plasmide Double Nickase (h): sc-402587-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- P2Y6 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il P2Y6 Double Nickase Plasmid (h) e il P2Y6 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira P2RY6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
P2Y6 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402587-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
P2Y6 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402587-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
P2RY6 codifica il recettore umano P2Y6, un recettore purinergico accoppiato a proteine G attivato principalmente dall’UDP extracellulare e in grado di attivare la segnalazione mediata da Gq/11. La stimolazione di P2Y6 promuove l’attivazione della fosfolipasi C, la mobilizzazione del Ca2+ intracellulare, la segnalazione tramite PKC e risposte trascrizionali a valle collegate a MAPK/NF-κB, che modulano il rilascio di citochine, la fagocitosi e il trasporto ionico epiteliale. Questo recettore partecipa alla segnalazione dell’immunità innata e all’infiammazione tissutale in ambito respiratorio, vascolare e gastrointestinale, e la sua disregolazione è stata associata a processi infiammatori e fibrotici, nonché a segnali del microambiente rilevanti per il cancro. In quanto recettore di superficie che integra segnali di pericolo mediati da nucleotidi, P2Y6 è spesso studiato nei circuiti che collegano la segnalazione purinergica all’attivazione immunitaria e alla funzione di barriera.
P2Y6 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus P2RY6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di P2RY6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di P2RY6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con P2RY6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.