P2X7 Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-400780-LAC-2

Il gene umano P2RX7 codifica il recettore purinergico P2X7, un canale cationico attivato dall’ATP che promuove l’ingresso di Na⁺/Ca²⁺ e l’efflusso di K⁺ per regolare la depolarizzazione di membrana, la maturazione delle citochine e, in condizioni di stimolazione prolungata, la formazione di un poro di grandi dimensioni associato a programmi di morte cellulare. P2X7 è un modulatore chiave della segnalazione dell’immunità innata, collegando il rilevamento dell’ATP extracellulare all’attivazione dell’inflammasoma (incluso NLRP3), alla processazione di IL-1β/IL-18 dipendente dalla caspasi-1 e alle risposte a valle delle vie NF-κB e MAPK in cellule mieloidi, microglia e altre popolazioni rilevanti per il sistema immunitario. Un’attività e un’espressione deregolate di P2RX7 sono state associate a infiammazione cronica e processi neuroinfiammatori, nonché ad alterazioni della funzione delle cellule immunitarie in contesti oncologici e autoimmuni. L’editing genomico di P2RX7 supporta studi meccanicistici sulla segnalazione purinergica, sul rilascio di mediatori infiammatori, sulla regolazione del fenotipo delle cellule immunitarie e sulla citotossicità dipendente dallo stimolo in modelli cellulari fisiologicamente rilevanti.

Le particelle di attivazione lentivirale P2X7 (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di P2RX7 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale P2X7 (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione P2RX7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di P2X7. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo P2RX7 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.