Partículas Lentivirales de Activación (h2) P2X7: sc-400780-LAC-2

El gen humano P2RX7 codifica el receptor purinérgico P2X7, un canal catiónico activado por ATP que promueve la entrada de Na⁺/Ca²⁺ y la salida de K⁺ para regular la despolarización de la membrana, la maduración de citocinas y, bajo una estimulación sostenida, la formación de poros de gran tamaño vinculada a programas de muerte celular. P2X7 es un modulador clave de la señalización inmunitaria innata, ya que acopla la detección de ATP extracelular a la activación del inflamasoma (incluido NLRP3), al procesamiento de IL-1β/IL-18 dependiente de la caspasa-1 y a las respuestas posteriores de las vías NF-κB y MAPK en células mieloides, microglía y otras poblaciones relevantes para la inmunidad. La desregulación de la actividad y la expresión de P2RX7 se ha asociado con inflamación crónica y procesos neuroinflamatorios, así como con una función alterada de las células inmunitarias en contextos de cáncer y autoinmunidad. La edición génica de P2RX7 facilita estudios mecanísticos de la señalización purinérgica, la liberación de mediadores inflamatorios, la regulación del fenotipo de las células inmunitarias y la citotoxicidad dependiente del estímulo en modelos celulares fisiológicamente relevantes.

Las partículas de activación lentiviral P2X7 (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de P2RX7 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral P2X7 (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción P2RX7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de P2X7. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo P2RX7 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.