Ox40 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423560-ACT

Il gene murino **Tnfrsf4** codifica **OX40 (CD134)**, un recettore co-stimolatorio inducibile della superfamiglia **TNFR**, espresso principalmente sui linfociti T attivati e su sottopopolazioni di linfociti T regolatori. Il legame di OX40 con **OX40L** promuove l’espansione clonale, la sopravvivenza e la differenziazione effettrice tramite una segnalazione dipendente da **TRAF** che converge sulle vie **NF-κB**, **MAPK** e **PI3K–AKT**, sostenendo la produzione di citochine e la formazione della memoria immunologica. Una segnalazione OX40 deregolata è implicata in processi infiammatori e autoimmuni e modella il contesto immunitario tumorale alterando la persistenza delle cellule T e le reti soppressive. Di conseguenza, **Tnfrsf4** è ampiamente studiato nei modelli murini di malattia per le soglie di attivazione delle cellule T, il supporto ai centri germinativi e il rimodellamento del microambiente immunitario.

Ox40 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Tnfrsf4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Ox40 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Tnfrsf4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Tnfrsf4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Ox40. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Tnfrsf4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Ox40 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Ox40 nelle cellule tumorali con espressione di Tnfrsf4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.