OTUD7B Plasmide Double Nickase (h): sc-403268-NIC

OTUD7B (nota anche come Cezanne) codifica una deubiquitinasi della famiglia OTU che modifica catene di ubiquitina legate a Lys11 e Lys63, contribuendo a modellare la segnalazione dipendente dall’ubiquitina e la stabilità proteica. Contrastando l’ubiquitinazione guidata dalle ligasi E3, OTUD7B influenza la proteostasi e la trasduzione dei segnali infiammatori, inclusa la dinamica della via di NF-κB e le relative risposte immunitarie innate. L’attività di OTUD7B è stata collegata alla regolazione delle reti di segnalazione delle citochine e all’adattamento allo stress cellulare, rendendola rilevante per studi su disregolazione immunitaria, infiammazione associata ai tumori e vulnerabilità della via dell’ubiquitina. La perturbazione funzionale di OTUD7B offre un approccio per analizzare i punti di controllo dipendenti dalla deubiquitinazione nei programmi trascrizionali e nei complessi di segnalazione prossimali ai recettori.

OTUD7B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus OTUD7B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di OTUD7B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di OTUD7B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con OTUD7B interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.