OSCP Plasmide Double Nickase (h): sc-404116-NIC

ATP5O codifica la proteina conferente sensibilità all’oligomicina (OSCP), una subunità del braccio periferico dell’ATP sintasi mitocondriale (Complesso V) che stabilizza l’oloenzima F1Fo e accoppia la forza proton-motrice alla produzione di ATP. OSCP contribuisce a mantenere efficiente la fosforilazione ossidativa, sostenendo la bioenergetica cellulare, il potenziale di membrana mitocondriale e l’omeostasi metabolica. L’alterazione di ATP5O/OSCP può modificare la funzione della catena di trasporto degli elettroni, aumentare le specie reattive dell’ossigeno e innescare una riprogrammazione metabolica compensatoria. La disregolazione dell’attività dell’ATP sintasi mitocondriale e dell’assemblaggio del complesso V è stata implicata in disfunzioni neurometaboliche e nel metabolismo delle cellule tumorali, rendendo ATP5O un bersaglio utile per studiare la segnalazione dello stress mitocondriale.

OSCP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATP5O nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATP5O. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATP5O. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATP5O interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.