OSCP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404116-ACT

ATP5O codifica per OSCP (oligomycin sensitivity-conferring protein), una subunità centrale della F1Fo-ATP sintasi mitocondriale che stabilizza lo stelo periferico e accoppia la forza proton-motrice alla produzione di ATP durante la fosforilazione ossidativa. Sostenendo una generazione efficiente di ATP collegata alla catena di trasporto degli elettroni, OSCP contribuisce alla bioenergetica cellulare, al mantenimento del potenziale di membrana mitocondriale e all’adattamento metabolico alla disponibilità di nutrienti e ossigeno. Alterazioni nell’assemblaggio o nella regolazione dell’ATP sintasi possono spostare l’equilibrio redox e favorire la segnalazione da stress mitocondriale, con rilevanza per la ricerca su neurodegenerazione, disfunzioni cardiometaboliche e riprogrammazione metabolica associata al cancro. In quanto proteina mitocondriale codificata dal nucleo, OSCP rappresenta anche un utile strumento per indagare il coordinamento mito-nucleare e i percorsi di proteostasi che influenzano la respirazione.

OSCP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ATP5O senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

OSCP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ATP5O nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ATP5O, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di OSCP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ATP5O nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da OSCP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via OSCP nelle cellule tumorali con espressione di ATP5O silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.