Plasmide CRISPR d'Activation (h) OMP: sc-403257-ACT

L’OMP humaine (olfactory marker protein, protéine marqueur olfactif) code une petite protéine cytosolique fortement enrichie dans les neurones sensoriels olfactifs matures, où elle soutient la transduction du signal déclenché par les odeurs ainsi que la maturation neuronale. L’OMP module la dynamique des seconds messagers intracellulaires, notamment les processus dépendants de l’AMPc et du Ca2+, influençant la cinétique des réponses et l’adaptation au sein de la voie olfactive. Les variations d’expression d’OMP sont largement utilisées comme indicateur de l’état de différenciation des neurones olfactifs et de l’intégrité des circuits dans les études de neurobiologie sensorielle. La dérégulation de la fonction et de la maturation des neurones olfactifs est pertinente pour les recherches sur l’hyposmie/l’anosmie et, plus largement, dans des contextes neurodéveloppementaux ou neurodégénératifs où les déficits olfactifs peuvent constituer un phénotype mesurable.

OMP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de OMP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

OMP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus OMP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription OMP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de OMP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus OMP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de OMP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie OMP dans les cellules tumorales présentant une expression de OMP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.