ODC Plasmide Double Nickase (h): sc-401055-NIC

ODC1 umano codifica l’ornitina decarbossilasi (ODC), l’enzima limitante della velocità nella biosintesi delle poliammine che catalizza la decarbossilazione dell’ornitina per generare putrescina, alimentando la produzione di spermidina e spermina. Attraverso il controllo dei pool intracellulari di poliammine, ODC influenza la replicazione del DNA, la dinamica della cromatina, la traduzione e la progressione del ciclo cellulare, integrandosi con la segnalazione responsiva ai fattori di crescita e con i programmi di stress metabolico. L’attività di ODC è regolata in modo rigoroso a livello di trascrizione, degradazione mediata da antizima e feedback da parte dei metaboliti delle poliammine, rendendo ODC1 un nodo chiave dell’omeostasi cellulare. Un metabolismo delle poliammine deregolato e un’espressione alterata di ODC1 sono stati associati a stati proliferativi e infiammatori e sono spesso oggetto di studio nella biologia del cancro e nelle ricerche sul rimodellamento metabolico.

ODC Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ODC1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ODC1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ODC1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ODC1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.