ODC Double Nickaseプラスミド (h): sc-401055-NIC

ヒトのODC1は、ポリアミン生合成における律速酵素であるオルニチン脱炭酸酵素（ODC）をコードしており、オルニチンの脱炭酸反応を触媒してプトレシンを産生し、そこからスペルミジンおよびスペルミンの産生を促進します。ODCは細胞内ポリアミンプールを制御することで、DNA複製、クロマチンダイナミクス、翻訳、細胞周期進行に影響を与え、成長因子応答性のシグナル伝達や代謝ストレスプログラムと統合的に機能します。ODC活性は転写レベル、アンチザイム（antizyme）介在性分解、ならびにポリアミン代謝産物によるフィードバックによって厳密に制御されており、ODC1は細胞恒常性における重要な結節点となっています。ポリアミン代謝の破綻やODC1発現の変化は、増殖性・炎症性状態と関連することが報告されており、がん生物学や代謝リモデリングの研究で頻繁に検討されています。

ODC ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ODC1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ODC1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ODC1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ODC1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。