Oct-6 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401826-ACT

POU3F1 (Oct-6) kodiert einen Transkriptionsfaktor mit POU-Domäne, der die Festlegung von Zelllinien und Differenzierungsprogramme reguliert, mit wichtigen Funktionen in neuralleistenderivierten Zellen und bei der Entwicklung von Schwann-Zellen. Oct-6 moduliert transkriptionelle Netzwerke, die den Austritt aus dem Zellzyklus, die Expression myelinisierungsassoziierter Gene und das Entwicklungstiming steuern, indem es an Promotoren/Enhancer bindet und mit anderen transkriptionellen Regulatoren kooperiert. Eine fehlregulierte POU3F1-Aktivität wurde mit aberranten Differenzierungszuständen und veränderter Proliferationsfähigkeit in Verbindung gebracht, was sie für Studien zu neuroentwicklungsbezogenen Signalwegen, Glia-Biologie und transkriptionsfaktorgetriebener zellulärer Plastizität relevant macht. In humanen Zellmodellen dient Oct-6 als Knotenpunkt zur Untersuchung der genregulatorischen Schaltkreise, die Schicksalsentscheidungen und stressresponsive Transkription zugrunde liegen.

Oct-6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen POU3F1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Oct-6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des POU3F1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der POU3F1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Oct-6-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native POU3F1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Oct-6-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Oct-6-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem POU3F1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.