Nup88 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404091-ACT

NUP88 codifica Nup88, un componente fondamentale del complesso del poro nucleare che contribuisce al trasporto nucleo‑citoplasmatico organizzando la faccia citoplasmatica del poro e supportando il traffico regolato di proteine e RNA. Attraverso interazioni con altre nucleoporine e con i recettori di trasporto, Nup88 aiuta a mantenere la permeabilità dell’involucro nucleare e influenza la progressione del ciclo cellulare, le risposte allo stress e la regolazione dell’espressione genica dipendente dai segnali. Alterazioni dell’espressione o della localizzazione di NUP88 sono state associate a dinamiche di trasporto compromesse e a un controllo aberrante dei programmi di proliferazione e differenziamento. Queste caratteristiche rendono NUP88 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulle vie di trasporto nucleare e sui loro legami con la regolazione del genoma nelle cellule umane.

Nup88 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NUP88 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nup88 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NUP88 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NUP88, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nup88. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NUP88 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nup88 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nup88 nelle cellule tumorali con espressione di NUP88 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.