NSD1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421970-ACT

Il gene murino **Nsd1** codifica **NSD1**, una metiltransferasi delle lisine istoniche contenente un dominio SET che catalizza principalmente la metilazione di **H3K36**, modellando l’accessibilità della cromatina e i programmi trascrizionali. NSD1 si integra nella regolazione epigenetica dell’espressione genica durante lo sviluppo, nella specificazione delle linee cellulari e nel controllo trascrizionale legato al ciclo cellulare, attraverso la modulazione degli stati di enhancer e promotori. Un’attività alterata di NSD1 è stata associata a paesaggi della cromatina deregolati e a output trascrizionali anomali implicati in disturbi dello sviluppo e nella biologia del cancro, rendendola un nodo rilevante per lo studio di fenotipi guidati dall’epigenoma. Nei sistemi murini, la perturbazione di **Nsd1** è comunemente impiegata per indagare i meccanismi di differenziamento, la stabilità del genoma e reti regolatorie dell’espressione genica dipendenti dal contesto.

NSD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Nsd1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NSD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Nsd1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Nsd1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NSD1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Nsd1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NSD1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NSD1 nelle cellule tumorali con espressione di Nsd1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.