Nrf1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421868-ACT

Il gene murino **Nfe2l1** codifica il fattore di trascrizione **Nrf1** della famiglia **CNC-bZIP**, un regolatore chiave della proteostasi cellulare e dell’equilibrio redox. Nrf1 coordina programmi trascrizionali che controllano la biogenesi delle subunità del proteasoma e il turnover proteico dipendente dall’ubiquitina, collegando l’omeostasi del reticolo endoplasmatico alle risposte antiossidanti e allo stress metabolico. Attraverso il crosstalk con la segnalazione di **NRF2** e il controllo di vie di detossificazione e di pathway associati ai mitocondri, Nrf1 contribuisce a mantenere la resilienza cellulare in condizioni di stress proteotossico. La disregolazione dell’attività di **Nfe2l1/Nrf1** è stata associata ad alterazioni della capacità del proteasoma, danno ossidativo e disfunzione metabolica, rendendola rilevante per studi meccanicistici su neurodegenerazione, biologia del fegato e adattamento allo stress delle cellule tumorali.

Nrf1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Nfe2l1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nrf1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Nfe2l1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Nfe2l1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nrf1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Nfe2l1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nrf1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nrf1 nelle cellule tumorali con espressione di Nfe2l1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.