Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403376-NIC

CHRNA2は、神経型ニコチン性アセチルコリン受容体（nAChR）のα2サブユニットをコードします。nAChRはリガンド作動性の陽イオンチャネルで、5量体（ヘテロペンタマー）として組み立てられ、迅速なコリン作動性神経伝達を担います。アセチルコリンまたはニコチン性アゴニストが結合すると、α2含有nAChRはNa⁺およびCa²⁺の流入を増加させ、膜興奮性や活動依存的シグナル伝達を形成します。これらのシグナルはCa²⁺によって調節される転写プログラムやシナプス可塑性とも交差します。CHRNA2の発現は中枢神経系における回路レベルの調節に寄与し、覚醒、注意、報酬関連シグナル伝達などの過程に影響を及ぼします。遺伝的多様性やnAChR機能の異常は、神経精神医学的表現型や物質使用に関連する形質と関連づけられており、CHRNA2はコリン作動性経路の攪乱に関する機序研究の標的として有用です。

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CHRNA2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CHRNA2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CHRNA2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CHRNA2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。