Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403376-NIC

CHRNA2 codifica la subunità α2 dei recettori nicotinici neuronali dell’acetilcolina (nAChR), canali cationici attivati da ligando che si assemblano come eteropentameri per mediare una rapida neurotrasmissione colinergica. In seguito al legame dell’acetilcolina o di agonisti nicotinici, gli nAChR contenenti α2 aumentano l’ingresso di Na⁺ e Ca²⁺, modulando l’eccitabilità di membrana e la segnalazione dipendente dall’attività, che interseca programmi trascrizionali regolati dal Ca²⁺ e la plasticità sinaptica. L’espressione di CHRNA2 contribuisce alla modulazione dei circuiti a livello del sistema nervoso centrale, influenzando processi quali arousal, attenzione e segnalazione legata alla ricompensa. La variabilità genetica e la disfunzione dei nAChR sono state associate a fenotipi neuropsichiatrici e a tratti correlati all’uso di sostanze, rendendo CHRNA2 un bersaglio utile per studi meccanicistici delle alterazioni delle vie colinergiche.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CHRNA2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CHRNA2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CHRNA2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CHRNA2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.