Plasmide CRISPR d'Activation (h) Neuregulin-2: sc-404043-ACT

NRG2 code la neureguline-2, un membre de la famille des neuregulines de type EGF, qui agit comme ligand des récepteurs tyrosine kinases de la famille ERBB. Via la signalisation ERBB2/ERBB3 et ERBB4, la neureguline-2 module la communication neuronale et gliale, le développement des synapses et la plasticité dépendante de l’activité, tout en influençant les sorties des voies PI3K–AKT et MAPK qui régulent la survie et la différenciation. L’expression de NRG2 et la dynamique des voies ERBB ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, et les altérations de la signalisation neureguline–ERBB sont étudiées dans le contexte des dysfonctionnements des circuits et des déséquilibres synaptiques. Ces propriétés font de NRG2 une cible utile pour disséquer la signalisation ligand-récepteur, les réseaux transcriptionnels et les réponses spécifiques à certains types cellulaires dans des modèles cellulaires humains.

Neuregulin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NRG2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Neuregulin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NRG2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NRG2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Neuregulin-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NRG2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Neuregulin-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Neuregulin-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de NRG2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.