Neuregulin-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404043-ACT

NRG2 codifica neuregulina-2, un membro della famiglia delle neureguline di tipo EGF che funge da ligando per le tirosin-chinasi recettoriali ERBB. Attraverso la segnalazione mediata da ERBB2/ERBB3 ed ERBB4, la neuregulina-2 modula la comunicazione tra neuroni e cellule gliali, lo sviluppo delle sinapsi e la plasticità dipendente dall’attività, influenzando inoltre gli output delle vie PI3K–AKT e MAPK che regolano sopravvivenza e differenziamento. L’espressione di NRG2 e la dinamica della via ERBB sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, e l’alterazione della segnalazione neuregulina–ERBB è oggetto di studio nel contesto di disfunzioni dei circuiti e squilibri sinaptici. Queste proprietà rendono NRG2 un bersaglio utile per analizzare la segnalazione recettore‑ligando, le reti trascrizionali e le risposte specifiche di determinati tipi cellulari in modelli cellulari umani.

Neuregulin-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NRG2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Neuregulin-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NRG2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NRG2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Neuregulin-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NRG2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Neuregulin-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Neuregulin-2 nelle cellule tumorali con espressione di NRG2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.