Neuregulin-1/NRG1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-431734-ACT

Neuregulina-1 (NRG1) è un fattore di crescita di tipo EGF, associato alla membrana e anche secreto, che segnala principalmente attraverso le tirosin-chinasi recettoriali ERBB3/ERBB4 per regolare la comunicazione cellula-cellula nel sistema nervoso e in altri tessuti. Nel topo, Nrg1 contribuisce allo sviluppo neuronale, alla maturazione sinaptica, alla mielinizzazione da parte delle cellule di Schwann e alle interazioni neuro-gliali, integrandosi nelle vie PI3K–AKT, MAPK/ERK e nei programmi trascrizionali a valle che modellano differenziamento e sopravvivenza. L’attività di NRG1 influenza la formazione e la plasticità dei circuiti ed è ampiamente utilizzata come punto d’accesso molecolare per studiare la segnalazione assone–glia e il rimodellamento dipendente dall’attività. Una deregolazione della segnalazione Nrg1/ERBB è stata associata a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, oltre che ad alterazioni della biologia dei nervi periferici, a supporto della sua rilevanza in modelli meccanicistici di malattia.

Neuregulin-1/NRG1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Nrg1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Neuregulin-1/NRG1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Nrg1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Nrg1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Neuregulin-1/NRG1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Nrg1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Neuregulin-1/NRG1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Neuregulin-1/NRG1 nelle cellule tumorali con espressione di Nrg1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.