Neuralized-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-407560-NIC

NEURL2 codifica Neuralized-2, una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING che promuove l’ubiquitinazione e il turnover di specifiche proteine di membrana e di segnalazione, modellando così il traffico dei recettori e la durata dei segnali. Nelle cellule umane, Neuralized-2 è stata collegata alla regolazione dei componenti della via di Notch e, più in generale, al controllo—da parte del sistema ubiquitina–proteasoma—delle decisioni di destino cellulare, della polarità e dei programmi di differenziamento. Attraverso questi meccanismi, l’attività di NEURL2 può influenzare l’omeostasi epiteliale e output trascrizionali dipendenti dal contesto a valle della segnalazione dello sviluppo. Un’alterata espressione di NEURL2 o l’interruzione della segnalazione mediata dall’ubiquitina sono state associate in letteratura a fenotipi legati al cancro e a deregolazione di pathway, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici della segnalazione e delle transizioni di stato cellulare.

Neuralized-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NEURL2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NEURL2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NEURL2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NEURL2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.