NDUFS1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-416401-LAC

NDUFS1 codifica una subunità centrale essenziale del complesso I mitocondriale (NADH:ubichinone ossidoreduttasi), che sostiene la fosforilazione ossidativa trasferendo elettroni dall’NADH all’ubichinone e contribuendo al pompaggio di protoni attraverso la membrana mitocondriale interna. Grazie al suo ruolo nella catena di trasporto degli elettroni, NDUFS1 influenza la produzione cellulare di ATP, il mantenimento del potenziale di membrana mitocondriale e l’omeostasi redox, con effetti a valle sulla segnalazione mediata dalle specie reattive dell’ossigeno e sull’adattamento metabolico. L’alterazione della funzione del complesso I è associata a fenotipi di disfunzione mitocondriale che colpiscono tessuti ad alta richiesta energetica e può modulare la suscettibilità allo stress ossidativo. In quanto gene mitocondriale codificato dal nucleo, NDUFS1 è ampiamente studiato nella bioenergetica, nel controllo di qualità mitocondriale e in modelli di malattia rilevanti per il deficit della catena respiratoria.

Le particelle di attivazione lentivirale NDUFS1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di NDUFS1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale NDUFS1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione NDUFS1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di NDUFS1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo NDUFS1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.