NDUFB5 Plasmide Double Nickase (m): sc-425783-NIC

Ndufb5 codifica NDUFB5, una subunità accessoria del complesso I della catena respiratoria mitocondriale (NADH:ubichinone ossidoreduttasi) che supporta un efficiente trasferimento di elettroni dall’NADH all’ubichinone e contribuisce alla fosforilazione ossidativa. Un corretto assemblaggio e una buona stabilità del complesso I aiutano a mantenere il potenziale di membrana mitocondriale, la produzione di ATP e l’omeostasi redox, collegando la funzione di NDUFB5 al metabolismo energetico cellulare e al controllo delle specie reattive dell’ossigeno. Nei modelli murini, la perturbazione dei componenti del complesso I è comunemente utilizzata per studiare la disfunzione mitocondriale nelle risposte allo stress bioenergetico, nell’adattamento metabolico e nelle vie della morte cellulare. In quanto fattore del complesso I codificato dal nucleo, NDUFB5 è rilevante per la ricerca sui meccanismi delle malattie mitocondriali e su fenotipi più ampi associati a una fosforilazione ossidativa compromessa.

NDUFB5 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ndufb5 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ndufb5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ndufb5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ndufb5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.