NDUFB5 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-425783-ACT

Il gene murino **Ndufb5** codifica **NDUFB5**, una subunità accessoria del complesso I della catena respiratoria mitocondriale (NADH:ubichinone ossidoreduttasi) che supporta la fosforilazione ossidativa e la produzione cellulare di ATP. Come componente del sistema di trasporto degli elettroni della membrana mitocondriale interna, NDUFB5 contribuisce al trasferimento di elettroni derivati dal NADH, al mantenimento del potenziale di membrana mitocondriale e alla regolazione dell’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno. Un’alterata funzione del complesso I è ampiamente associata alle risposte allo stress metabolico e a vie di disfunzione mitocondriale che si intersecano con la neurodegenerazione, fenotipi cardiometabolici e la segnalazione infiammatoria. Ndufb5 è quindi rilevante per studiare come la bioenergetica mitocondriale rimodelli lo stato cellulare durante lo sviluppo e nei modelli di malattia nei sistemi murini.

NDUFB5 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Ndufb5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NDUFB5 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Ndufb5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Ndufb5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NDUFB5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Ndufb5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NDUFB5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NDUFB5 nelle cellule tumorali con espressione di Ndufb5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.