NaBC1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-405950-LAC

BCAS1 (NaBC1) è una proteina umana altamente arricchita nelle cellule della linea degli oligodendrociti ed è ampiamente utilizzata come marcatore degli oligodendrociti di nuova formazione in fase di mielinizzazione. La sua espressione segue programmi di differenziamento che coordinano il rimodellamento del citoscheletro, l’espansione di membrana e la formazione della guaina mielinica ricca di lipidi, collegando la biologia di BCAS1 alle interazioni assone–glia e all’omeostasi della sostanza bianca. Alterazioni nei pattern di espressione di BCAS1 sono state riportate in contesti demielinizzanti e neuroinfiammatori, a sostegno della sua rilevanza per lo studio della dinamica della rimielinizzazione e dell’eterogeneità gliale. Nei sistemi sperimentali, la modulazione di BCAS1 offre uno strumento per interrogare stati trascrizionali associati alla maturazione degli oligodendrociti e a processi cellulari legati alla mielina.

Le particelle di attivazione lentivirale NaBC1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di BCAS1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale NaBC1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione BCAS1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di NaBC1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo BCAS1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.