MZF-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403142-ACT

Myeloid zinc finger 1 (MZF1/MZF-1) è un fattore di trascrizione a dita di zinco C2H2 con dominio KRAB, con ruoli di primo piano nell’impegno di linea ematopoietica e nella differenziazione mieloide. Regola programmi di espressione genica che influenzano la progressione del ciclo cellulare, l’apoptosi e la migrazione cellulare, integrandosi con reti trascrizionali più ampie che controllano la proliferazione e le risposte allo stress. Un’attività di MZF1 deregolata è stata associata a stati di differenziazione alterati e a un’anomala riprogrammazione trascrizionale osservata nei disturbi ematologici e in molteplici contesti di tumori solidi. In quanto regolatore legante il DNA, MZF-1 è spesso studiato per il suo impatto sulla segnalazione oncogenica, sul potenziale metastatico e sui circuiti trascrizionali specifici di linea.

MZF-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MZF1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MZF-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MZF1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MZF1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MZF-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MZF1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MZF-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MZF-1 nelle cellule tumorali con espressione di MZF1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.