Myocardin Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-431931-ACT

Myocd codifica la myocardina, un potente coattivatore trascrizionale che interagisce con il fattore di risposta al siero (SRF) per regolare programmi genici dipendenti dalla CArG box che controllano la differenziazione della muscolatura liscia e cardiaca. La myocardina integra segnali provenienti dalla dinamica RhoA/actina e da vie associate alle MAPK per coordinare l’assemblaggio dell’apparato contrattile, l’organizzazione del citoscheletro e il cambiamento fenotipico delle cellule muscolari lisce vascolari. Un’attività alterata di MYOCD è associata a un rimodellamento vascolare disregolato e a un’espressione anomala di geni della muscolatura cardiaca, rendendolo un nodo utile per studiare meccanismi rilevanti in modelli di ipertensione, aterosclerosi e cardiomiopatia. Nei sistemi murini, la perturbazione di Myocd offre un approccio maneggevole per interrogare il controllo trascrizionale della specificazione e della maturazione delle linee muscolari.

Myocardin Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Myocd senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Myocardin Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Myocd nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Myocd, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Myocardin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Myocd nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Myocardin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Myocardin nelle cellule tumorali con espressione di Myocd silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.