MTAP Plasmide Double Nickase (m): sc-426257-NIC

Il gene Mtap del topo codifica la metiltioadenosina fosforilasi (MTAP), un enzima chiave della via di recupero della metionina che converte la 5′-metiltioadenosina in adenina e 5-metiltioribosio-1-fosfato, collegando così il metabolismo delle poliammine all’omeostasi delle purine e dei donatori di gruppi metilici. L’attività di MTAP sostiene l’equilibrio dei nucleotidi, la capacità di metilazione e l’adattabilità metabolica legata allo stato redox, integrandosi con il metabolismo a un carbonio e con i processi dipendenti dalla S-adenosilmetionina. Un’espressione alterata o la perdita di MTAP può rimodellare gli stati metabolici cellulari e influenzare programmi associati alla proliferazione attraverso cambiamenti nei pool di adenina e nella segnalazione sensibile alla metilazione. Nella ricerca biomedica, Mtap viene comunemente studiato per il suo impatto su vulnerabilità metaboliche, regolazione epigenetica e risposte allo stress in cellule e tessuti di mammifero.

MTAP Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Mtap nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Mtap. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Mtap. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Mtap interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.