MT-MMP-4 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423912-ACT

Il gene murino **Mmp17** codifica la metalloproteinasi di matrice di tipo membrana 4 (**MT-MMP-4**), un’endopeptidasi zinco-dipendente ancorata alla membrana che rimodella la matrice extracellulare pericellulare tramite la scissione di proteine della matrice e la modulazione di substrati presenti sulla superficie cellulare. MT-MMP-4 contribuisce a cascate proteolitiche che coinvolgono l’attivazione delle MMP, il turnover della ECM e la dinamica della membrana basale, influenzando migrazione e adesione cellulare, nonché la morfogenesi dei tessuti. Modellando l’architettura stromale e la segnalazione dipendente da proteasi, **Mmp17** è rilevante per studi su fibrosi, rimodellamento associato all’infiammazione e biologia del microambiente tumorale, in cui una proteolisi alterata può influire su programmi di invasione e angiogenesi.

MT-MMP-4 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Mmp17 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MT-MMP-4 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Mmp17 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Mmp17, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MT-MMP-4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Mmp17 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MT-MMP-4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MT-MMP-4 nelle cellule tumorali con espressione di Mmp17 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.