MLK2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-406968-LAC

MAP3K10 codifica la mixed lineage kinase 2 (MLK2), una MAP chinasi chinasi chinasi che integra segnali di stress e infiammatori a monte per regolare le cascate MAPK, in particolare le vie JNK e p38. Attraverso la fosforilazione delle MKK a valle, MLK2 influenza programmi trascrizionali che controllano apoptosi, risposte citochiniche, dinamica dei neuriti e rimodellamento del citoscheletro. Una deregolazione della segnalazione di MLK2 è stata collegata ad alterazioni della sopravvivenza neuronale e della segnalazione infiammatoria, a sostegno della sua rilevanza per la neurodegenerazione, l’adattamento allo stress delle cellule tumorali e fenotipi associati al sistema immunitario in modelli umani. In quanto nodo di segnalazione a monte di più rami MAPK, MLK2 viene spesso studiata per il crosstalk tra vie, l’attivazione chinasica specifica dello stimolo e gli effetti dipendenti dal contesto sulle decisioni di destino cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale MLK2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MAP3K10 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MLK2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MAP3K10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MLK2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MAP3K10 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.