Mitoferrin 2 Double Nickase Plasmid (m): sc-434219-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Mitoferrin 2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Mitoferrin 2 Double-Nickase-Plasmid (m) und Mitoferrin 2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Slc25a28 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Mitoferrin 2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-434219-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Mitoferrin 2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-434219-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Slc25a28 kodiert Mitoferrin 2, einen Carrier der inneren Mitochondrienmembran, der zweiwertiges Eisen in die mitochondriale Matrix importiert und damit die Hämbiosynthese sowie die Assemblierung von Eisen‑Schwefel‑(Fe‑S)-Clustern unterstützt. Durch die Steuerung der Eisenverfügbarkeit in den Mitochondrien trägt Mitoferrin 2 zur Koordination der oxidativen Phosphorylierung, des Redoxgleichgewichts und von Wegen der mitochondrialen Qualitätskontrolle bei, die gegenüber eisengetriebenen reaktiven Sauerstoffspezies empfindlich sind. Eine Störung dieses Transporters kann die Programme der Erythrozyten- und Nicht‑Erythrozyten‑Eisennutzung beeinträchtigen und zu Defekten im mitochondrialen Stoffwechsel sowie in Stressantworten führen. Als konservierte Komponente der zellulären Eisenhomöostase wird Slc25a28 häufig in Zusammenhängen untersucht, die mitochondriale Dysfunktion mit anämiebezogenen Mechanismen und mit neurodegenerationsrelevanten Phänotypen oxidativen Stresses in Mausmodellen verknüpfen.
Mitoferrin 2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Slc25a28-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Slc25a28 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Slc25a28-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Slc25a28-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.