MIP-3α Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-417242-ACT

CCL20 codifica la chemochina macrophage inflammatory protein-3α (MIP-3α), un ligando secreto di CCR6 che dirige la chemiotassi di cellule dendritiche immature, linfociti T effettrici/memoria e cellule B verso i siti di attivazione epiteliale. MIP-3α è indotta dalla segnalazione NF-κB e MAPK a valle dei recettori di riconoscimento dei pattern e delle citochine infiammatorie, collegando il sensing immunitario innato al reclutamento leucocitario e alla difesa della barriera mucosale. Questo asse chemiokinico modella l’organizzazione del tessuto linfoide, il campionamento dell’antigene e la polarizzazione immunitaria associata a Th17 all’interno del microambiente tissutale. Una segnalazione CCL20/CCR6 deregolata è stata implicata in condizioni infiammatorie croniche e nell’infiammazione associata ai tumori, rendendola rilevante per lo studio del traffico delle cellule immunitarie e del rimodellamento dei circuiti infiammatori.

MIP-3α Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CCL20 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MIP-3α Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CCL20 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CCL20, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MIP-3α. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CCL20 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MIP-3α nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MIP-3α nelle cellule tumorali con espressione di CCL20 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.