METTL7B Plasmide Double Nickase (h): sc-408340-NIC

METTL7B (methyltransferase-like 7B) codifica una presunta metiltransferasi dipendente dalla S-adenosil-L-metionina, localizzata principalmente in compartimenti endomembranosi, con ruoli riportati nella regolazione del metabolismo associato ai lipidi e delle risposte cellulari allo stress. L’espressione di METTL7B è stata collegata a vie che influenzano l’omeostasi di membrana, la segnalazione infiammatoria e l’equilibrio redox, coerentemente con la sua associazione al rimodellamento metabolico in diversi tipi cellulari. Livelli alterati di METTL7B sono stati osservati in molteplici contesti rilevanti per la malattia, inclusi la biologia del cancro e programmi trascrizionali associati alla neurodegenerazione, rendendolo un nodo utile per studiare la regolazione genica dipendente dal contesto. L’analisi funzionale di METTL7B supporta studi meccanicistici sulla modifica, dipendente dalla metilazione, di proteine o piccole molecole e sugli effetti a valle sullo stato cellulare.

METTL7B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus METTL7B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di METTL7B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di METTL7B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con METTL7B interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.