MEK-5 Plasmide Double Nickase (h): sc-401688-NIC

MAP2K5 codifica MEK-5, una chinasi MAP chinasi a doppia specificità che fosforila e attiva preferenzialmente ERK5 (MAPK7) per regolare programmi trascrizionali legati a proliferazione, differenziamento, adattamento allo stress e rimodellamento del citoscheletro. La segnalazione MEK-5–ERK5 integra input provenienti da fattori di crescita e segnali ambientali e influenza fattori a valle come i regolatori trascrizionali della famiglia MEF2, plasmando le risposte di sopravvivenza e motilità cellulare. La disregolazione dell’asse MAP2K5/ERK5 è stata associata ad alterazioni della trasduzione del segnale in contesti quali il rimodellamento delle vie oncogeniche, la biologia cardiovascolare e la segnalazione infiammatoria, rendendo MAP2K5 un nodo utile per analizzare il crosstalk tra vie di segnalazione. Nei modelli cellulari umani, la perturbazione dell’attività di MEK-5 supporta studi meccanicistici sulla specificità delle reti MAPK e sulla segnalazione compensatoria tra cascate MAPK parallele.

MEK-5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MAP2K5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MAP2K5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MAP2K5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MAP2K5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.