MEF-2C Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416594-ACT

MEF2C codifica il fattore di trascrizione umano MEF-2C, un regolatore della famiglia MADS-box/MEF2 che integra la segnalazione dipendente dal calcio con il controllo della cromatina e della trascrizione. MEF-2C coordina programmi di espressione genica coinvolti nella differenziazione muscolare, nello sviluppo neuronale, nel rimodellamento sinaptico e nella specificazione delle linee cellulari immunitarie attraverso vie quali CaMK/Calcineurina–NFAT, MAPK e interazioni con le HDAC di classe IIa. Nel nucleo, MEF-2C si lega agli elementi di risposta MEF2 per modulare la trascrizione dipendente dall’attività e le transizioni di stato cellulare in molteplici tessuti. Una deregolazione dell’espressione di MEF2C o dei suoi circuiti regolatori è stata associata a fenotipi neuroevolutivi, a un’alterazione dell’equilibrio eccitatorio/inibitorio e a una riprogrammazione trascrizionale legata al cancro, a supporto del suo impiego come nodo per studi meccanicistici.

MEF-2C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MEF2C senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MEF-2C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MEF2C nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MEF2C, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MEF-2C. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MEF2C nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MEF-2C nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MEF-2C nelle cellule tumorali con espressione di MEF2C silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.